NobleRyder 常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒
NobleRyder 常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒 即用型液體試劑 P2820-600ml
常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了*經(jīng)典的考馬斯亮藍(lán)R250染色和脫色方法,可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè)。
常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒中的染色液和脫色液經(jīng)過(guò)改良,不含有毒的甲醇,含有刺激性氣味的乙酸。采用常規(guī)染色脫色方法累計(jì)時(shí)間達(dá)到2~3h后可以觀察到蛋白條帶,采用快速染色脫色方法20min左右即可觀察到蛋白條帶。如果想觀察到更清晰的蛋白條帶則需延長(zhǎng)染色、脫色時(shí)間。
NobleRyder 常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒
產(chǎn)品組成:
編號(hào) 名稱 | P2820 600ml | Storage |
試劑(A): Commassie Blue Stain | 100ml | RT |
試劑(B): Commassie Blue脫色液 | 500ml | RT |
使用說(shuō)明書(shū) | 1份 |
自備材料:
1、水平搖床或側(cè)擺搖床
2、蒸餾水
3、20%甘油水溶液
操作步驟(僅供參考):
(一)常規(guī)染色脫色方法
1、PAGE電泳后取凝膠放入適量Commassie Blue Stain中,確保染色液充分覆蓋凝膠。
2、置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng),室溫染色1h或更長(zhǎng)時(shí)間。具體的染色時(shí)間取決于凝膠的厚度和染色時(shí)的溫度。凝膠較厚,溫度較低,則染色時(shí)間宜適當(dāng)延長(zhǎng)。凝膠較薄,溫度較高,則染色時(shí)間可以適當(dāng)縮短。通常染色至凝膠的顏色和染色液的顏色非常接近,在染色液中幾乎看不清凝膠時(shí),可以認(rèn)為已染色充分。染色2~4h或更長(zhǎng)時(shí)間不會(huì)對(duì)最終的染色效果產(chǎn)生負(fù)面影響。
3、倒出染色液,該染色液可以回收重復(fù)使用2~3次。
4、加入適量Commassie Blue脫色液,確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。
5、置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng),室溫脫色4~24h。期間更換脫色液2~4次,直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去,并且蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。通常蛋白條帶在脫色1~2h后即可出現(xiàn)。脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙,可以使部分染料吸附在吸水紙上,加快脫色。脫色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)導(dǎo)致蛋白條帶的顏色變淺。
6、完成脫色后把凝膠保存在水中,用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會(huì)發(fā)生溶漲。如需避免溶漲,可以把膠保存在含20%甘油水溶液中,長(zhǎng)期保存可以制備干膠。
(二)快速染色脫色方法
1、PAGE電泳結(jié)束后取膠放入Commassie Blue stain中,微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,立即停止加熱。通常對(duì)于膠濃度大于10%的膠比較堅(jiān)韌,在發(fā)生煮沸時(shí)不易破損;對(duì)于膠濃度小于10%的膠,宜盡量避免煮沸,以免出現(xiàn)膠碎裂的情況。
2、隨后在染色液溫度較高的情況下,在室溫?fù)u床上搖動(dòng)5~10min。
3、倒出染色液,染色液可以回收重復(fù)使用2~3次。
4、加入適量Commassie Blue脫色液,確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。
5、微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,立即停止加熱。
6、隨后在脫色液溫度較高的情況下,在搖床上搖動(dòng)5~10min。此時(shí)通常可以觀察到比較清楚的蛋白條帶。
7、更換新鮮的脫色液,重復(fù)步驟5和步驟6,直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去,蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。
8、完成脫色后,把凝膠保存在水中,用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會(huì)發(fā)生溶漲。如需避免溶漲,可以把膠保存在含20%甘油水溶液中,長(zhǎng)期保存可以制備干膠。
注意事項(xiàng):
1.染色時(shí)如果把凝膠和染色液一起放置在微波爐中適當(dāng)加熱,可以大大加快染色速度。但加熱時(shí)宜盡量避免沸騰,以免出現(xiàn)因暴沸而導(dǎo)致的凝膠碎裂。
2.如果希望染色的背景更低,希望獲得更加清晰的蛋白條帶,可以加入適量的室溫蒸餾水進(jìn)行洗滌。通過(guò)蒸餾水洗滌可以進(jìn)一步降低背景。在4℃蒸餾水中浸泡過(guò)夜可以獲得背景更低,條帶更清晰的條帶。在次日對(duì)4℃蒸餾水浸泡過(guò)夜的已經(jīng)進(jìn)行了染色的凝膠再同前一天一樣進(jìn)行染色和洗滌可以進(jìn)一步改善染色效果,獲得更好的考染蛋白條帶。
3.常規(guī)染色脫色方法耗時(shí)較長(zhǎng),但檢測(cè)靈敏度更高,染色效果更加穩(wěn)定??焖偃旧撋椒ㄍǔz測(cè)靈敏度略低,并且在微波爐加熱的過(guò)程中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)暴沸導(dǎo)致凝膠碎裂的情況,需特別注意。另外微波爐加熱導(dǎo)致的高溫會(huì)引起染色液和脫色液中的乙酸的揮發(fā)。
4.本染色液呈酸性,有輕微腐蝕性,使用時(shí)請(qǐng)作必要防護(hù)。
5.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期: 12個(gè)月有效。
NobleRyder 常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒