夜夜嗨Av色一区二区不卡-嫩草伊人久久精品少妇aV-91人妻丝袜无码中文字幕-久久久老熟女一区二区三区

產(chǎn)品目錄
產(chǎn)品展示
當(dāng)前位置:首頁 > 全部產(chǎn)品 > > NobleRyder > P4812NobleRyder RIPA裂解液(中)

NobleRyder RIPA裂解液(中)

  • 型   號:P4812
  • 價   格:
  • 更新時間:2024-09-26
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

NobleRyder RIPA裂解液(中) 即用型液體試劑 P4812-100ml

RIPA裂解液(中)

產(chǎn)品簡介:

多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白,如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液(中)(RIPA Lysis Buffer)是采用一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解并獲得總蛋白的裂解液,其裂解強度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)。所獲得的蛋白質(zhì)可用于Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)等。

Medium RIPA Lysis Buffer主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等組成,并含有多種蛋白酶抑制劑成分,可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。

 NobleRyder RIPA裂解液(中)

產(chǎn)品組成:

                     編號

名稱

P4812

Storage

Medium RIPA Lysis Buffer

100ml

-20℃

PMSF(100mM)

1.5ml

-20℃

使用說明書

1份

 

操作步驟(僅供參考)

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1.取Medium RIPA Lysis Buffer置室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。

2.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液,用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次,低速離心,棄上清,留取沉淀。

3.按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Medium RIPA Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解15~30min,通常裂解液作用于細(xì)胞1~3秒內(nèi),細(xì)胞就會被裂解。通常6孔板每4.孔細(xì)胞加入100μl解液已經(jīng)足夠,如果細(xì)胞密度很高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200~250μl。

5.10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

6.進行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

1.取Medium RIPA Lysis Buffer 置室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。

2.低速離心懸浮細(xì)胞,棄上清,收集沉淀。

3.用手指輕彈細(xì)胞,使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Medium RIPA Lysis Buffer 。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200~4.250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。

5.10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

6.進行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)組織樣本

1.取Medium RIPA Lysis Buffer 置室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。

2.把組織jian切成細(xì)小的碎片,越小越好。

3.取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過程盡量控制在1~2min之內(nèi),以減少蛋白的降解。

4.按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15~30min。

5.步驟3、4亦可以采用如下過程:按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例,加入含有PMSF的Medium RIPA Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,該過程盡量控制在1~2min之內(nèi),以減少蛋白的降解。

6.10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

7.進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 

注意事項:

1.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不用清洗。

2.如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。

3.如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50~100萬細(xì)胞/離心管,然后再裂解。大團的細(xì)胞較難裂解充分,而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。

4.如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

5.溶解NobleRyder RIPA Lysis Buffer時,應(yīng)盡量縮短溶解時間,避免有效成分失效。

6.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗;如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,7.則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如NF-KB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

8.細(xì)胞裂解的操作步驟,應(yīng)置于冰上或4℃進行。

 

有效期: 12個月有效。

NobleRyder RIPA裂解液(中)

留言框

  • 產(chǎn)品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯(lián)系電話:

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細(xì)地址:

  • 補充說明:

  • 驗證碼:

    請輸入計算結(jié)果(填寫阿拉伯?dāng)?shù)字),如:三加四=7

北京諾博萊德科技有限公司 版權(quán)所有
京ICP備12025092號-2   sitemap.xml
電話:
010-62817090
  • 點擊這里給我發(fā)消息
  • 點擊這里給我發(fā)消息
  • 點擊這里給我發(fā)消息
日本一区日本二区日本三区| 外国美女激情午夜在线观看视频| 欧美日韩精品区一区二区三| 国产精品午夜寻花约高颜值| 色狠狠一区二区三区中文 | 夫妻生活一级黄色录像| 国产污污污视频免费在线观看| 午夜福利小视频在线看| 欧美在线电影一区二区| 久久亚洲国产精品五月天婷| 国产成人精品久久久久精品日日 | 久久精品视频久章草视频| 国产亚洲精品美女久久久| 丝袜美腿在线观看中文字幕| 外国美女激情午夜在线观看视频| 97在线观看视频免费| 夫妻生活一级黄色录像| 麻豆欧美精品国产综合久久| 欧美成人一区二区三区在线视频| 亚洲精品一区二区小说| 91香蕉福利日韩精品导航| 狂野欧美性一区二区三区| 久久亚洲国产精品五月天婷 | 国产精品日本孕妇网站| 亚洲午夜精品福利网站| 91码精品一区二区三区| 亚洲精品一区二区小说| 五月天色婷婷色丁香色| 夫妻生活一级黄色录像| 亚洲成人高清av后入| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美激情免费观看网站| 亚洲日本欧美激情综合| 国产污污污视频免费在线观看 | 国产成人免费97在线| 亚洲欧美精品一区久久| 国产亚洲精品美女久久久| 夜夜爽人妻夜夜爽天天摸| 91香蕉福利日韩精品导航| 欧美色欧美亚洲一区二区三区| 麻豆欧美精品国产综合久久|