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Hygromycin B 潮霉素B Roche

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  • 價   格:
  • 更新時間:2024-08-24
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

Hygromycin B 潮霉素B Roche是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。

Hygromycin B 潮霉素B Roche作用機制:  

潮霉素B是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。 

Hygromycin B 潮霉素B Roche抗性基因: 

對潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hph)的基因。至今發(fā)現(xiàn)兩種來源: 

?Streptomyces hygroscopicus產(chǎn)生的Hph抗性基因;

?Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae內(nèi)質(zhì)粒攜帶的Hph抗性基因(常用);  

生物應用: 

1)  篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph 載體的原核細胞或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞); 

2)  由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™和lasticidin S聯(lián)合使用,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個不同載體的細胞株;

雙抗性穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選的抗生素作用機制及抗性

抗生素

抗性機制

抗性基因

哺乳動物篩選濃度

潮霉素B

干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀

Hph

200~500μg/mL

G418

干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成

Tn5/Tn601

100~1000μg/mL

Zeocin

摻入或者切割DNA引起細胞死亡

Sh ble

50~100μg/mL

blasticidin S

核糖體上抑制肽鍵形成

Bsd/BSD

3~50μg/mL

3)抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑制翻譯的功效;

4)作為驅(qū)蟲藥加入動物飼料; 

應用濃度: 

潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL,*濃度需要殺滅曲線來確定。 

哺乳動物細胞·200-500 μg/mL;細菌/植物細胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000 μg/mL; 

產(chǎn)品使用:

使用一:殺滅曲線確定*殺死濃度(僅作參考,因個人檢測體系而異)

(1)往組織培養(yǎng)級的96孔板內(nèi)加入未轉(zhuǎn)染細胞,細胞密度約50-200細胞/孔;細胞貼壁之后,往每孔加入含不同濃度(如50-1000μg/mL,至少5個濃度)潮霉素B的200μL新鮮培養(yǎng)基;

(2)37℃,5% CO2培養(yǎng)箱孵育細胞10-14天;

(3)培養(yǎng)5-7天后更換新的培養(yǎng)液,培養(yǎng)液內(nèi)含有相應濃度的潮霉素B;

(4)10-14天后使用細胞增殖方法如MTT,CCK-8等評估細胞活力;也可以通過檢測細胞克隆數(shù)或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的zui小濃度為*篩選濃度。

使用二:篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞

(1)        對于貼壁細胞,直接吸去60mm培養(yǎng)皿內(nèi)的轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)基,然后加入含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基5-6ml;對于懸浮細胞,無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)基,然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;

(2)        5-7天后,如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;

(3)        再孵育細胞5-7天;

(4)        10-14天孵育后,培養(yǎng)體系中只含有能夠表達潮霉素B抗性表型的活細胞。因此篩選之后如步驟一,更換不含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基。 

應用實例:

物種

細胞系/株

質(zhì)粒/載體

篩選濃度

E.Coli

HB101/XL1-Blue/K802

pEX-2

95~950 μM 

Rice

Protoplast

pTRA132/pTRA141

95~285 μM

Barley

Callus

binary vector

50 μg/mL

Aspergillus nidulans

G191/pDJB3-1

pDH25

250 ,>1000

Chicken

B cell line DT40

N/A

1500 μg/mL

Human

HEK293

pUHD10-3

50 μg/mL

Mouse

J1 ES

pBS524

200μg/mL

Human

HMEC-1

pCEP-4

200 μg/mL

Drosophila

S2

pAc, pCoHygro

500 μg/mL

保存方法:溶液直接存放在2℃~8℃,至少存放1年。

 

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