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正確選擇CST抗體的方法分享
更新時間:2019-09-12   點擊次數(shù):2321次
   正確選擇CST抗體一般需要如下幾個方面的信息:

  1)蛋白的名稱及亞型:某些蛋白具有多種不同的亞型,如IKK、PKC、p38等,這需要在選擇抗體之前確定要研究的蛋白亞型。還有些抗體由于其抗原選擇的是不同蛋白亞型共有的肽段區(qū)域,是可以同時識別多個亞型的,我們一般都會在抗體的名稱中加入(pan)字樣來標明,如Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691,就可以識別Akt1、2、3等多個亞型,結(jié)果反映的也是所有Akt亞型的總水平。

  2)磷酸化修飾位點:由于CST抗體有很多是針對蛋白的磷酸化修飾位點,因此CST抗體的命名往往會在蛋白名稱后加上括號來標注,如Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody #9451,Ser65即此抗體識別的修飾位點,在選擇合適的CST抗體用于特定修飾位點研究時,需要特別注意。有關(guān)不同修飾位點的功能,可以通過查閱文獻確定,或登陸http://www.phosphosite.org(目前全的蛋白修飾位點數(shù)據(jù)庫)查詢,也可以通過點擊CST網(wǎng)站該產(chǎn)品頁面中的Background(背景知識)來獲取。另外,由于有的蛋白存在不同亞型且序列高度同源,而不同亞型的某些磷酸化修飾位點周圍的序列*相同,因此CST的某些抗體往往會同時識別不同亞型的相似修飾位點,如Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb #2697既可識別Ser176位點磷酸化的IKKα,也可以識別Ser180位點磷酸化的IKKβ,結(jié)果反映的也是兩者共有的水平。

  3)抗體已驗證的應用(如WB,IHC,IP等):CST抗體一般會在出廠前對常見的抗體應用(WB,IHC,IP, ChIP,IF,F(xiàn)low)進行內(nèi)部驗證,以確定可以滿足的不同應用要求。通過驗證,達到質(zhì)檢要求的抗體會明確標記,以備參考。一些沒有標明的應用,往往是因為經(jīng)過驗證沒有達到質(zhì)檢標準而不推薦。比如Acetyl-Histone H3 (Lys18) (D8Z5H) Rabbit mAb #13998可以滿足除IF以外的所有其他5種應用,有的客戶會認為,既然該抗體可以用于IHC,根據(jù)經(jīng)驗推斷應該可以用于IF,那么很有可能會浪費很多時間和試劑而不能獲得結(jié)果。也有一些沒有標明的應用,可能是因為我們沒有用于檢測的樣本而沒有檢測CST不推薦您使用沒有標明的應用??梢蕴暨x其他的貨號,我們可能有適用于這個應用的更好的其它產(chǎn)品。

  另外,一般直接帶有偶聯(lián)物的一抗,只能用于特定的應用,也會明確標記。

  4)抗體能夠識別的樣本種屬:CST抗體一般會在出廠前對常見的不同種屬目標樣本進行內(nèi)部驗證,以確定可以滿足的不同種屬類型,可以在產(chǎn)品頁面的Species-Reactivity一欄中看到(如人、小鼠、大鼠等)。通過驗證,達到質(zhì)檢要求的種屬會明確標記,以備參考。對于有些抗體,在 Species-Reactivity 的種屬里,有些種屬會加上括號,這表示根據(jù)序列同源比對,是99.99%符合的,但是我們并沒有做過關(guān)于這些種屬的實驗,所以不建議使用。

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